The relationship between systemic disorders and anatomical outcomes after Descemet membrane endothelial keratoplasty / A relação entre distúrbios sistêmicos e resultados anatômicos para ceratoplastia endotelial da membrana de Descemet

ABSTRACT Purpose: The aim of this study was to investigate the association of anatomical outcomes and medications of patients with systemic diseases who underwent Descemet membrane endothelial keratoplasty with donor factors. Methods: Sixty nondiabetic donors of endothelial grafts and 60 patients who underwent operation by a single surgeon were included in this retrospective study. The patients' data, including the presence of diabetes mellitus and hypertension, antidiabetic-antihypertensive medications, and intracameral tamponades and anatomical outcomes, were recorded. The donor data were obtained from eye bank records. Results: Eighteen patients had type 2 diabetes mellitus (30%) and 34 had hypertension (56.6%). Among the patients with diabetes mellitus, 13 were receiving a single-agent antidiabetic drug, 4 were receiving dual oral antidiabetic therapy, and 1 was receiving insulin therapy. Among the hypertensive patients, 11 had monotherapy and 23 had dual antihypertensive therapy. Postoperatively, 35 patients (58.3%) had an endothelial attachment, 8 (13.3%) received reinjection, 7 (11.7%) required re-Descemet membrane endothelial keratoplasty, and 10 (16.7%) underwent penetrating keratoplasty. The mean donor age was 51.2 ± 14.1 years. The most common cause of donor death was cardiopulmonary arrest (36/60 cases; 60.0%). Regression analysis revealed that the presence of diabetes mellitus significantly disrupted graft attachment (p=0.034), while the presence of hypertension, antidiabetic and antihypertensive medication use, and the type of tamponade used in the patients, and the age, sex, cause of death, and specular endothelial cell count of donors were not statistically significantly associated with graft attachment (p>0.05). Conclusion: In this study, the anatomical outcomes of Descemet membrane endothelial keratoplasty surgery were affected by recipient and donor factors. The presence of diabetes mellitus in the recipient significantly negatively affected graft attachment.

RESUMO Objetivo: Investigar a associação de desfechos ana tômicos com doenças sistêmicas e medicamentos em casos submetidos à ceratoplastia endotelial da membrana de Descemet e fatores relativos aos doadores. Métodos: Foram incluídos neste estudo retrospectivo enxertos obtidos de doadores não diabéticos e 60 casos operados por um único cirurgião. Foram registrados os dados dos casos, incluindo a presença de diabetes mellitus e hipertensão, medicamentos antidiabéticos e anti-hipertensivos, tamponamentos intracamerais e desfechos anatômicos. Os dados dos doadores foram obtidos dos prontuários do banco de olhos. Resultados: Dezoito casos tinham diabetes mellitus tipo 2 (30%) e 34 tinham hipertensão (56,6%). Entre os casos de diabetes mellitus, 13 estavam em uso de uma medicação antidiabética de agente único, 4 estavam em terapia antidiabética oral dupla e 1 estava em insulinoterapia. Entre os hipertensos, 11 estavam em monoterapia e 23 em terapia anti-hipertensiva dupla. No pós-operatório, 35 pacientes (58,3%) submeteram-se a uma fixação endotelial, enquanto 8 casos (13,3%) receberam reinjeção, 7 casos (11,7%) necessitaram de ceratoplastia endotelial da membrana de Descemet e 10 casos (16,7%) foram submetidos a uma ceratoplastia penetrante. A média de idade dos doadores foi de 51,2 ± 14,1 anos. A causa mais comum de morte do doador foi parada cardiorrespiratória (36/60 casos; 60,0%). A análise de regressão revelou que a presença de diabetes mellitus causa distúrbios significativos na fixação do enxerto (p=0,034), enquanto a presença de hipertensão, o uso de medicamentos antidiabéticos e anti-hipertensivos, o tipo de tamponamento usado, a idade, o sexo, a causa da morte e a contagem de células endoteliais especulares dos doadores não demonstraram associações estatisticamente significativas com a fixação do enxerto (p>0,05). Conclusões: Os resultados anatômicos da cirurgia de ceratoplastia endotelial da membrana de Descemet são afetados por fatores do receptor e do doador. A presença de diabetes mellitus no receptor teve um significativo impacto negativo na fixação do enxerto.

Avaliação da Disfunção Endotelial em Casos de COVID-19 com Dilatação Fluxo-Mediada / Evaluation of Endothelial Dysfunction in COVID-19 With Flow-Mediated Dilatation

Resumo Fundamento: Sabe-se que a inflamação desempenha um papel crucial em muitas doenças, incluindo a COVID-19. Objetivo: Utilizando a dilatação fluxo-mediada (DFM), objetivou-se avaliar os efeitos da inflamação na função endotelial de pacientes com COVID-19. Métodos: Este estudo foi realizado com um total de 161 indivíduos, dos quais 80 foram diagnosticados com COVID-19 nos últimos seis meses (48 mulheres e 32 homens com idade média de 32,10±5,87 anos) e 81 eram controles saudáveis (45 mulheres e 36 homens com idade média de 30,51±7,33 anos). Os achados do ecocardiograma transtorácico e da DFM foram analisados em todos os indivíduos. Resultados com p<0,05 foram considerados estatisticamente significantes. Resultados: O ecocardiograma e a DFM do grupo COVID-19 foram realizados 35 dias (intervalo: 25-178) após o diagnóstico. Não houve diferença estatisticamente significativa nos parâmetros ecocardiográficos. Em contraste, a DFM (%) foi significativamente maior no grupo controle (9,52±5,98 versus 12,01±6,18; p=0,01). Na análise multivariada com o modelo stepwise progressivo, a DFM foi significativamente diferente no grupo controle em relação ao grupo COVID-19 (1,086 (1,026-1,149), p=0,04). O teste de correlação de Spearman indicou que a DFM (r=0,27; p=0,006) apresentou correlação positiva fraca com a presença de COVID-19. Conclusão: Os achados deste estudo apontam para disfunção endotelial induzida por COVID-19, avaliada por DFM, na fase inicial de recuperação.

Abstract Background: Inflammation is known to play a crucial role in many diseases, including COVID-19. Objective: Using flow-mediated dilatation (FMD), we aimed to assess the effects of inflammation on endothelial function in COVID-19 patients. Methods: This study was conducted with a total of 161 subjects, of whom 80 were diagnosed with COVID-19 within the last six months (comprising 48 women and 32 men with a mean age of 32.10 ± 5.87 years) and 81 were healthy controls (comprising 45 women and 36 men with a mean age of 30.51 ± 7.33 years). We analyzed the findings of transthoracic echocardiography and FMD in all subjects. All results were considered statistically significant at the level of p < 0.05. Results: The echocardiography and FMD of the COVID-19 group were performed 35 days (range: 25-178) after diagnosis. There was no statistically significant difference in echocardiographic parameters. Differently, FMD (%) was significantly higher in the control group (9.52 ± 5.98 vs. 12.01 ± 6.18, p=0.01). In multivariate analysis with the forward stepwise model, FMD was significantly different in the control group compared to the COVID-19 group (1.086 (1.026 - 1.149), p=0.04). A Spearman's correlation test indicated that FMD (r=0.27, p=0.006) had a weak positive correlation with the presence of COVID-19. Conclusion: Our findings point to COVID-19-induced endothelial dysfunction, as assessed by FMD, in the early recovery phase.

Short-term endothelial cell density changes after gonioscopy-assisted transluminal trabeculotomy / Alterações de curto prazo na densidade celular endotelial associadas à trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia

ABSTRACT Purpose: To investigate the reduction in corneal endothelial cell density associated with gonioscopy-assisted transluminal trabeculotomy (GATT) in a short-term follow-up period. Methods: A retrospective analysis of the medical charts of patients with open-angle glaucoma who underwent gonioscopy-assisted transluminal trabeculotomy isolated or combined with phacoemulsification (phaco-gonioscopy-assisted transluminal trabeculotomy) was conducted. Patients who underwent phacoemulsification alone were included as controls. The endothelial cell density data (assessed using a specular microscope) before and at the first month after operation were collected and then compared. Results: Sixty-two eyes previously treated with gonioscopy-assisted transluminal trabeculotomy (gonioscopy-assisted transluminal trabeculotomy, n=39 eyes; phaco-gonioscopy-assisted transluminal trabeculotomy, n=23 eyes) fulfilled the inclusion criteria. The mean age of the study patients was 61.3 ± 18.4 years in the stand-alone gonioscopyassisted transluminal trabeculotomy group and 60.4 ± 11.9 in phaco-gonioscopy-assisted transluminal trabeculotomy group. Men comprised 66.6% of the patients in the isolated gonioscopyassisted transluminal trabeculotomy group and 56.5% of those in the phaco-gonioscopy-assisted transluminal trabeculotomy group. The mean visual field defects (mean deviation index) were -13.9 ± 9.2 and -10.3 ± 7.7 dB in the isolated gonioscopy-assisted and phaco-gonioscopy-assisted transluminal trabeculotomy groups, respectively. The patients in the former group presented a mean endothelial cell density reduction of 28.8 cells/mm² (1.31%; p=0.467). In the latter group, the mean endothelial cell density loss was 89.4 cells/mm² (4.36%; p=0.028). The control eyes (23 patients) presented a mean endothelial cell density change of 114.1 ± 159.8 cells/mm² (4.41%; p=0.505). The endothelial cell density reduction in the phaco-gonioscopy-assisted transluminal trabeculotomy group was not significantly different from that in the controls (p=0.81). Conclusions: Gonioscopy-assisted transluminal trabeculotomy appears to be a safe procedure for the corneal endothelial cell layer when performed either isolated or combined with cataract extraction in a short-term follow-up period.

RESUMO Objetivo: Investigar a redução na densidade celular endotelial corneana associada à trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia (GATT) em curto prazo. Métodos: Análise retrospectiva de prontuários médicos de pacientes com glaucoma de ângulo aberto que foram submetidos à trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia isolada ou combinada com facoemulsificação. Pacientes que foram submetidos à facoemulsificação isolada foram incluídos como controles. Dados da densidade celular endotelial corneana (avaliada através de microscópio especular) pré-operatória e ao primeiro mês pós-operatório foram coletados e comparados. Resultados: Sessenta e dois olhos que foram submetidos à trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia (trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia=39 olhos; faco com trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia=23 olhos) passaram pelos critérios de inclusão. A idade média dos pacientes estudados era 61,3 ± 18,4 anos no grupo trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia isolada e 60,4 ± 11,9 anos no grupo faco com trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia. Homens eram 66,6% do grupo trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia isolada e 56,5% do grupo faco com trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia. O defeito perimétrico médio (Mean Deviation) era -13,9 ± 9,2 dB e -10,3 ± 7,7 dB nos grupos trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia isolada e faco com trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia respectivamente. O grupo que fora submetido à trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia isolada apresentou redução média da densidade celular endotelial corneana de 28,8 células/mm² (1,31%; p=0,467). No grupo faco com trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia, a redução média da densidade celular endotelial corneana foi de 89,4 células/mm² (4,36%; p=0,028). Olhos controle (23 olhos) apresentaram redução média da densidade celular endotelial corneana de 114,1 ± 159,8 células/mm² (4,41%; p=0,505). A redução na densidade celular endotelial corneana no grupo faco com trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia não foi significativamente diferente do grupo controle (p=0,81). Conclusões: A trabeculotomia transluminal assistida por gonioscopia parece ser segura para a camada endotelial corneana em um curto prazo quando realizada de forma isolada ou combinada com cirurgia de catarata.

Os LncRNAs Estão Envolvidos no Processo de Aterosclerose em Diversos Níveis / LncRNAs are Involved in the Process of Atherosclerosis at Diverse Levels

Resumo A aterosclerose é a causa mais comum de doença cardiovascular em todo o mundo, ela está associada a uma alta incidência de eventos clínicos. O acúmulo de evidências elucidou que os RNAs longos não codificantes (LncRNAs) são uma nova classe de transcritos com papéis críticos nos processos fisiopatológicos da aterosclerose. Nesta revisão, resumimos o progresso recente dos LncRNAs no desenvolvimento da aterosclerose. Descrevemos principalmente os diversos mecanismos regulatórios dos LncRNAs nos níveis transcricionais e pós-transcricionais. Este estudo pode fornecer informações úteis sobre os LncRNAs como alvos terapêuticos ou biomarcadores para o tratamento da aterosclerose.

Abstract Atherosclerosis is the most common cause of cardiovascular disease globally, associated with a high incidence of clinical events. Accumulating evidence has elucidated that long non-coding RNAs (lncRNAs) as a novel class of transcripts with critical roles in the pathophysiological processes of atherosclerosis. In this review, we summarize the recent progress of lncRNAs in the development of atherosclerosis. We mainly describe the diverse regulatory mechanisms of lncRNAs at the transcriptional and post-transcriptional levels. This study may provide helpful insights about lncRNAs as therapeutic targets or biomarkers for atherosclerosis treatment.

Corneal structure and endothelial morphological changes after uneventful phacoemulsification in type 2 diabetic and nondiabetic patients / Alterações da estrutura e endotélio da cornea após facoemulsificação sem complicações em pacientes diabéticos tipo 2 e não diabéticos

ABSTRACT Purpose: The aim of this study was to compare corneal structure and endothelial morphological changes after uneventful phacoemulsification cataract surgery between type 2 diabetic and nondiabetic patients and to determine the preoperative and intraoperative factors that may predict greater endothelial cell density loss. Methods: Forty-five diabetic pa­tients (45 eyes) and 43 controls (43 eyes) with age-related cataract were enrolled in this prospective observational study. Corneal (thickness and volume) and anterior segment parameters were measured by Scheimpflug tomography; endothelial cell density and morphology (coefficient of variation of cell size, hexagonal cells) were recorded using noncontact specular microscopy. Patients were evaluated preoperatively and at one and six months after surgery. Univariate and multivariate linear regression analyses were performed to evaluate the relationship between demographic, clinical, ocular, and intraoperative parameters and postoperative endothelial cell density changes at six months. Results: Significant postoperative endothelial cell loss occurred one month after surgery in both groups (p<0.001), which remained stable until month 6; there were no differences between patients with and without diabetes mellitus at any time point. The mean postoperative central corneal thickness at one and six months did not change significantly from the mean preoperative value in either group (p>0.05). Multivariate linear regression analysis showed that older age (p=0.042) and higher cataract grades (p=0.001) were significantly associated with greater endothelial cell density reduction at six-month follow-up. Conclusion: This study showed that older age and denser cataracts might be associated with greater endothelial cell density reduction after cataract surgery. Other factors, such as diabetes mellitus and preoperative anterior segment parameters, did not influence postoperative changes in endothelial cell density.

RESUMO Objetivo: Comparar a estrutura da córnea e as alterações mor­fológicas endoteliais após cirurgia de catarata por facoemulsificação sem intercorrências entre pacientes com diabetes mellitus tipo 2 e não diabéticos; e determinar quais fatores pré e intra-operatórios relacionados com a maior redução da densidade celular endotelial. Métodos: Quarenta e cinco diabéticos (45 olhos) e 43 (43 olhos) controlos com catarata relacionada à idade foram incluídos neste estudo observacional prospectivo. Os parâmetros da córnea (espessura e volume) e do segmento anterior foram medidos pela tomografia Scheimpflug; a densidade e morfologia celular endotelial (coeficiente de variação do tamanho das células, células hexagonais) foram registrados usando microscopia especular não contato. Os pacientes foram avaliados no pré-operatório, 1 e 6 meses após a cirurgia. Foi realizada uma análise de regressão linear uni e multivariada para avaliar a relação entre os parâmetros demográficos, clínicos, oculares e intra-operatórios com a redução da densidade celular endotelial aos 6 meses. Resultados: Nos dois grupos houve uma perda significativa de células endoteliais ao 1º mês pós-ope­ratório (p<0,001), que permaneceu estável até ao 6º mês; sem diferenças estatisticas entre os grupos diabetes mellitus e não diabetes mellitus em qualquer avaliação. A espessura média da córnea no pós-operatório central aos 1 e 6 meses não mudou significativamente em relação ao valor médio pré-operatório nos dois grupos (p>0.05). A análise de regressão multivariada linear mostrou que a idade avançada (p=0.042) e os graus mais elevados de catarata (p=0.001) foram significativamente associados à maior redução densidade celular endotelial aos 6 meses de seguimento. Conclusão: Este estudo mostrou que a idade avançada e as cataratas mais densas podem predispor a uma maior redução densidade celular endotelial após a cirurgia de catarata. Outros fatores, como diabetes mellitus e parâmetros pré-operatórios do segmento anterior, não influenciaram significativamente as alterações pós-operatórias da densidade celular endotelial.

Suitability of the muscle O2 resaturation parameters most used for assessing reactive hyperemia: a near-infrared spectroscopy study / Adequação de parâmetros de ressaturação muscular de O2 mais utilizados na avaliação da hiperemia reativa: um estudo por espectroscopia no infravermelho próximo

Abstract Background There is a spectrum of possibilities for analyzing muscle O2 resaturation parameters for measurement of reactive hyperemia in microvasculature. However, there is no consensus with respect to the responsiveness of these O2 resaturation parameters for assessing reactive hyperemia. Objectives This study investigates the responsiveness of the most utilized muscle O2 resaturation parameters to assess reactive hyperemia in the microvasculature of a clinical group known to exhibit impairments of tissue O2 saturation (StO2). Methods Twenty-three healthy young adults, twenty-nine healthy older adults, and thirty-five older adults at risk of cardiovascular disease (CVD) were recruited. Near-infrared spectroscopy (NIRS) was used to assess StO2 after a 5-min arterial occlusion challenge and the following parameters were analyzed: StO2slope_10s, StO2slope_30s, and StO2slope_until_baseline (upslope of StO2 over 10s and 30s and until StO2 reaches the baseline value); time to StO2baseline and time to StO2max (time taken for StO2 to reach baseline and peak values, respectively); ∆StO2reperfusion (the difference between minimum and maximum StO2 values); total area under the curve (StO2AUCt); and AUC above the baseline value (StO2AUC_above_base). Results Only StO2slope_10s was significantly slower in older adults at risk for CVD compared to healthy young individuals (p < 0.001) and to healthy older adults (p < 0.001). Conversely, time to StO2max was significantly longer in healthy young individuals than in older adult at CVD risk. Conclusions Our findings suggest that StO2slope_10s may be a measure of reactive hyperemia, which provides clinical insight into microvascular function assessment.

Resumo Contexto Existe um espectro de possibilidades na análise dos parâmetros de ressaturação de O2 muscular como uma medida de hiperemia reativa na microvasculatura. No entanto, não há consenso com relação à responsividade desses parâmetros de ressaturação de O2 para avaliação de hiperemia reativa. Objetivos Este estudo investigou a capacidade de resposta dos parâmetros de ressaturação muscular de O2 mais utilizados para avaliar a hiperemia reativa na microvasculatura de um grupo clínico conhecido por apresentar comprometimento da saturação de O2 (StO2). Métodos Foram recrutados 23 jovens saudáveis, 29 idosos saudáveis e 35 idosos com risco para doença cardiovascular. A espectroscopia no infravermelho próximo foi usada para avaliar a StO2 após um teste de oclusão arterial de 5 minutos, no qual os seguintes parâmetros foram analisados: StO2slope_10s, StO2slope_30s e StO2slope_until_baseline (inclinação da StO2 em 10 s, 30 s e até StO2 atingir valores basais); tempo para StO2baseline e tempo para StO2máx (o tempo necessário para StO2 atingir os valores da linha de base e o máximo, respectivamente); ∆StO2reperfusão (a diferença entre o valor de StO2mínimo e StO2máximo); área total sob a curva (StO2AUCt); e área sob a curva acima do valor da linha de base (StO2AUC_above_base). Resultados Apenas StO2slope_10s foi significativamente mais lento em idosos em risco de doença cardiovascular comparados com indivíduos jovens saudáveis (p < 0,001) e idosos saudáveis (p < 0,001). Por outro lado, o tempo para StO2max foi significativamente maior em indivíduos jovens saudáveis do que em idosos em risco de doença cardiovascular. Conclusões Nossos achados sugerem que StO2slope_10s pode ser uma medida de hiperemia reativa, que fornece informações clínicas sobre a avaliação da função microvascular.

Pharmacological characterization of the calcium influx pathways involved in nitric oxide production by endothelial cells / Caracterização farmacológica das vias de influxo de cálcio envolvidas na produção de óxido nítrico por células endoteliais

ABSTRACT Objective: To characterize the calcium influx pathways implicated in the sustained elevation of endothelial intracellular calcium concentration, required for the synthesis and release of relaxing factors. Methods: We evaluated the effect of the newly synthesized pyrazole derivatives, described as selective inhibitors for ORAI (BTP2/Pyr2 and Pyr6) and TRPC3 (Pyr3 and Pyr10) channels, upon endothelium- and extracellular calcium-dependent relaxations stimulated by acetylcholine and thapsigargin, in pre-constricted rat thoracic aortic rings. Results: Acetylcholine and thapsigargin responses were completely reverted by Pyr2 and Pyr6 (1 to 3μM). Pyr3 (0.3 to 3μM) caused a rapid reversal of acetylcholine (6.2±0.08mg.s−1) and thapsigargin (3.9±0.25mg.s−1) relaxations, whereas the more selective TRPC3 blocker Pyr10 (1 to 3μM) had no effect. The recently described TRPC4/5 selective blocker, ML204 (1 to 3μM), reverted completely acetylcholine relaxations, but minimally thapsigargin induced ones. Noteworthy, relaxations elicited by GSK1016790A (TRPV4 agonist) were unaffected by pyrazole compounds or ML204. After Pyr2 and Pyr6 pre-incubation, acetylcholine and thapsigargin evoked transient relaxations similar in magnitude and kinetics to those observed in the absence of extracellular calcium. Sodium nitroprusside relaxations as well as phenylephrine-induced contractions (denuded aorta) were not affected by any of pyrazole compounds (1 to 3μM). Conclusion: These observations revealed a previously unrecognized complexity in rat aorta endothelial calcium influx pathways, which result in production and release of nitric oxide. Pharmacologically distinguishable pathways mediate acetylcholine (ORAI/TRPC other than TRPC3/TRPC4 calcium-permeable channels) and thapsigargin (TRPC4 not required) induced calcium influx.

RESUMO Objetivo: Caracterizar as vias do influxo de cálcio envolvidas no aumento sustentado da concentração intracelular de cálcio na célula endotelial, essencial para a síntese e a liberação de fatores relaxantes. Métodos: Analisamos o efeito de derivados pirazólicos sintetizados recentemente, descritos como inibidores seletivos para canais ORAI (BTP2/Pyr2 e Pyr6) e TRPC3 (Pyr3 e Pyr10), nos relaxamentos dependentes de endotélio e cálcio extracelular, produzidos por acetilcolina e tapsigargina, em anéis pré-contraídos da aorta torácica de rato. Resultados: As respostas de acetilcolina e tapsigargina foram completamente revertidas por Pyr2 e Pyr6 (1 a 3μM). Pyr3 (0,3 a 3μM) produziu reversão rápida dos relaxamentos de acetilcolina (6,2±0,08mg.s−1) e tapsigargina (3,9±0,25mg.s−1), enquanto o bloqueador mais seletivo para TRPC3, Pyr10 (1 a 3μM), não apresentou efeito. ML204 (1 a 3μM), bloqueador seletivo de TRPC4, descrito há pouco tempo, reverteu os relaxamentos induzidos por acetilcolina de forma completa, mas afetou minimamente aqueles produzidos por tapsigargina. Os derivados pirazólicos ou ML204 não afetaram os relaxamentos estimulados com GSK1016790A (TRPV4-agonista). Ainda, após pré-incubação com Pyr2 e Pyr6, acetilcolina e tapsigargina provocaram relaxamentos transitórios semelhantes em magnitude e cinética àqueles observados na ausência de cálcio extracelular. Os relaxamentos do nitroprussiato de sódio e as contrações induzidas pela fenilefrina (aorta sem endotélio) não foram afetados pelos compostos pirazólicos (1 a 3μM). Conclusão: Essas observações revelaram uma complexidade desconhecida das vias de influxo de cálcio no endotélio da aorta de rato, que resultam na produção e na liberação de óxido nítrico. Vias distinguíveis farmacologicamente medeiam o influxo estimulado por acetilcolina (ORAI TRPC, diferentes de TRPC3 TRPC4) e tapsigargina (TRPC4 não requerido).

Corneoscleral contact lenses fitting on irregular corneas after laser-assisted in situ keratomileusis / Lentes de contato corneoesclerais adaptadas em córneas irregulares após cirurgia LASIK

ABSTRACT Purpose: We aimed to describe the outcomes of corneoscleral contact lens fitting with multi-aspherical geometry designs in patients with irregular corneas after laser-assisted in situ keratomileusis (LASIK). Methods: This was a retrospective series of 18 patients (age, 26-38 years) selected from an eye clinic database. Participants were required to have unsatisfactory visual acuity with their current contact lenses or spectacles after LASIK for myopia correction. All patients were fitted with corneoscleral contact lenses designed to correct corneal surface irregularities. A diagnostic trial set was used for fitting, and assessments were performed according to a standardized methodology. Subjective comfort, visual acuity, central corneal thickness, endothelial cell count, and corneal-compensated intraocular pressure were evaluated. The follow-up period was one year. Results: Contact lens use was discontinued in 3 patients, thus leaving 24 eyes from 8 females and 7 males for analysis. The fitting characteristics were optimal in terms of lens position and movement. Statistically significant improvements were found in the best spectacle-corrected vision from before fitting to the visual acuity after fitting (p<0.001). Moreover, the patients reported high subjective comfort ratings and usage times (12.98 ± 2.3 hours/day). After one year of wear, visual acuity, subjective comfort, and usage time were maintained. No statistically significant adverse changes developed in the corneas over this period. Conclusion: Corneoscleral contact lenses with a multi-aspherical geometry design provide optimal visual acuity, improved comfort, and prolonged usage times in patients with irregular corneas after LASIK.

RESUMO Objetivo: Descrever os resultados do ajuste de lentes de contato corneoesclerais com geometria multiasférica em pacientes com córneas irregulares após cirurgia de ceratomileuse in situ assistida por laser (LASIK). Métodos: Esta foi uma série retrospectiva de 18 pacientes (idade, 26-38 anos) selecionados a partir de um banco de dados de uma clínica oftalmológica. Os participantes foram escolhidos ao manifestaram acuidade visual insatisfatória com suas lentes de contato ou óculos atuais depois de terem sido submetidos à LASIK para correção de miopia. Todos os pacientes receberam lentes de contato corneoesclerais projetadas para corrigir irregularidades na superficie da córnea. Um conjunto diagnóstico de prova foi usado para a adaptação e as avaliações foram feitas de acordo com uma metodologia padronizada. O conforto subjetivo, a acuidade visual, a espessura central da córnea, a contagem de células endoteliais e a pressão intraocular compensada da córnea foram avaliados. O período de acompanhamento foi de um ano. Resultados: O uso de lentes de contato foi descontinuado em 3 pacientes, deixando 24 olhos de 8 mulheres e 7 homens para análise. As características de adaptação foram ótimas em termos de posição e movimento da lente. Melhorias estatisticamente significativas foram encontradas na melhoria da visão corrigida por óculos antes de se ajustar a acuidade visual após a adaptação (p<0,001). Além disso, os pacientes relataram altos índices subjetivos de conforto e tempo de uso (12,98 ± 2,3 horas/dia). Após um ano de uso, a acuidade visual, o conforto subjetivo e o tempo de uso foram mantidos. Não houve alterações adversas estatisti­camente significativas nas córneas ao longo deste período. Conclusão: As lentes de contato corneoesclerais com projeto geométrico multiasférico proporcionam acuidade visual ideal, maior conforto e tempo de uso prolongado em pacientes com córneas irregulares após o LASIK.

Corneal endothelial cell density and pterygium: a cross-sectional study / Contagem de células endoteliais e pterígio: um estudo transversal

ABSTRACT Purpose: To investigate the effects of pterygium on corneal endothelial cell density in patients with unilateral pterygium. Methods: We performed a cross-sectional analysis of data from patients with unilateral pterygium who were selected from September 1, 2015 to July 31, 2016 at Hospital de Base do Distrito Federal to assess the corneal endothelial cell density, coefficient of variation in the cell area, hexagonality, and corneal pa­chymetric results. In all patients, noncontact specular microscopy was performed in both eyes and a minimum endothelial cell count of 75 cells/mm2 was required for inclusion in the study. The contralateral eye served as the control. Results: Sixty-one patients were included in the study. Twenty-nine (47.5%) patients were men and 32 (52.5%) were women (mean age, 50.84 ± 13.8). The percentage of pterygium that invaded the cornea ranged from 4.87% to 24.59% (median, 9.70% ± 4.99%). The mean corneal endothelial cell density (cells/mm) was lower in the pterygium eyes than in the controls (2451.83 ± 284.96 vs. 2549.95 ± 268.94, respectively; p=0.04). No differences in the mean coefficients of variation of cell size, hexagonality, and corneal pachymetric results were observed between the patients and controls. The Pearson correlation test showed a significant negative linear relationship between pterygium invasion and endothelial cell density [p<0.001, n=61, r=-0.553 (95% CI, -0.34 to -0.73)]. Conclusion: Compared with the contralateral eyes, those of patients with unilateral pterygium were associated with a decrease in corneal endothelial cell density.

RESUMO Objetivo: Investigar os efeitos do pterígio na densidade de células endoteliais cor­neanas em pacientes com pterígio unilateral. Métodos: Foi realizado um estudo do tipo transversal envolvendo pacientes com pterígio unilateral selecionados entre 1 de setembro de 2015 a 31 de julho de 2016 no Hospital de Base do Distrito Federal para avaliar a densidade de células endoteliais corneanas, coeficiente de variação da área celular, hexagonalidade, e paquimetria corneana. Em todos os pacientes foram realizadas microscopias especulares de não-contato em ambos os olhos, sendo necessário obter uma contagem endotelial mínima de 75 células/mm2 para que o paciente fosse incluído no estudo. O olho contralateral funcionou como grupo controle. Resultados: Um total de 61 pacientes foram incluídos no estudo. Vinte e nove (47,5%) eram homens e 32 (52,5%) mulheres. A média de idade era de 50,84 ±13,8. O percentual de invasão do pterígio na córnea variou entre 4,87% a 24,59%, com uma mediana de 9,70% ± 4,99%. A media de densidade de células endoteliais corneanas foi menor nos olhos com pterígio quando comparados ao grupo controle (2451,83 ± 284,96 vs 2549,95 ± 268,94; p=0,04). Não foram encontradas diferenças entre os casos e controles em relação à média do coeficiente de variação da área celular, hexagonalidade, e paquimetria. Teste de correlação de Pearson mostrou uma relação linear negativa entre a invasão do pterígio e a densidade de células endoteliais corneanas [p<0,001, n=61, r=-0,553 (95% CI -0,34 a -0,73)]. Conclusão: Em pacientes com pterígio unilateral, o olho com pterígio está asso­ciado a uma menor densidade de células endoteliais corneanas quando comparado ao olho contralateral.

Avaliação do citoesqueleto e da barreira endotelial pulmonar na malária experimental / Evaluation of the cytoskeleton and pulmonary endothelial barrier in experimental malaria

Infecções por Plasmodium sp. podem levar a um quadro respiratório grave, com complicações pulmonares denominadas lesão pulmonar aguda e síndrome do desconforto respiratório agudo (LPA/SDRA). Inflamação aguda, lesão do endotélio alveolar e do parênquima pulmonar, disfunção e aumento da permeabilidade da barreira alvéolo-capilar e, consequente, formação de edema, caracterizam esta síndrome. O modelo experimental, que utiliza o parasita murino Plasmodium berghei ANKA e camundongos da linhagem DBA/2, é empregado no estudo de mediadores imunológicos e fatores que propiciam o estabelecimento das lesões pulmonares associados à LPA/SDRA. Diversos estímulos podem atuar diretamente no aumento da permeabilidade endotelial por meio da desestabilização dos microtúbulos, rearranjo dos microfilamentos de actina e contração das células endoteliais, via sinalização de Rho-GTPases, causando disfunção da barreira endotelial. Desta forma, este trabalho tem como objetivo avaliar as alterações do citoesqueleto em células endoteliais primárias pulmonares de camundongos DBA/2 (CEPP-DBA/2), as vias de sinalização das principais Rho-GTPases e o estresse oxidativo, causados pela presença de eritrócitos parasitados com esquizontes de P. berghei ANKA (EP-PbA). As CEPP-DBA/2 foram estimuladas com TNF, VEGF ou IFNγ, em diferentes tempos de exposição, seguido da incubação com EP-PbA. Assim, foram realizados ensaios de imunofluorescência para análise do rearranjo de microfilamentos de actina e da desestabilização de microtúbulos. As vias de sinalização das Rho-GTPases foram avaliadas por Western blot, para as expressões proteicas de RhoA, Cdc42 e MLC. Além disso, ensaio fluorométrico foi realizado para detectar a produção de espécies reativas de oxigênio, resultantes do estímulo com eritrócitos parasitados. CEPP-DBA/2 estimuladas por EP-PbA, VEGF, TNF ou IFNγ, em associação ou não, apresentaram alterações morfológicas nos microfilamentos de actina e aumento dos espaços interendoteliais. Imagens de imunofluorescência também mostram desestabilização de microtúbulos e desfosforilação de FAK, causadas por EP-PbA. Os ensaios de permeabilidade validam que os eritrócitos parasitados com formas maduras de P. berghei induziram aumento da permeabilidade microvascular nas CEPP-DBA/2. Além disso, estas células, estimuladas com EP-PbA, demonstraram elevada produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), o que pode estar contribuindo com o desenvolvimento de estresse oxidativo e com a injúria endotelial, assim como, com o aumento da permeabilidade vascular. O mais interessante é que estas alterações endoteliais podem estar relacionadas ao aumento da razão RhoA/Cdc42, da expressão proteica de MLC fosforilada e do sinal de ativação de RhoA. Em conjunto, estes resultados mostram envolvimento dos eritrócitos parasitados com esquizontes de Plasmodium berghei ANKA na desorganização do citoesqueleto e na disfunção da barreira alvéolo-capilar, via RhoA/Rho-kinase, o que pode estar contribuindo com a patogênese da LPA/SDRA associada à malária

Infections by Plasmodium sp. can lead to a serious respiratory condition with pulmonary complications, named acute lung injury and acute respiratory distress syndrome (ALI/ARDS). Acute inflammation, alveolar endothelium and lung parenchyma injuries, dysfunction and increased permeability of the pulmonary alveolar-capillary barrier and consequent formation of edema characterize this syndrome. Several stimuli can directly increase endothelial permeability through actin microfilaments rearrangement, via Rho- GTPases signaling, leading to endothelial barrier dysfunction. DBA/2 mice infected with Plasmodium berghei ANKA develop ALI/ARDS similar to that observed in humans. The purpose of this research was to assess cytoskeletal changes in DBA/2 mice primary microvascular lung endothelial cells (PMLEC), verify the signaling pathways of the Rho- GTPases and analyze the oxidative stress on these cells in the presence of P. berghei ANKA-infected red blood cells (PbA-iRBC). PMLEC were stimulated by TNF, VEGF or IFNγ followed by incubation with PbA-iRBC. Immunofluorescence assays were performed to analyze actin microfilaments rearrangement and microtubules destabilization. Western blot for RhoA, Cdc42 and MLC proteins were conducted to assess alterations in signaling pathways of Rho-GTPases. In addition, a fluorimetric assay was performed to detect the production of reactive oxygen species resulting from PbA-iRBC stimulus. P. berghei ANKA, VEGF, TNF and IFNγ stimuli, in association or not, caused morphological disturbances in actin microfilaments of PMLEC and an increase of intercellular spaces. Moreover, immunofluorescence images showed microtubules destabilization and FAK dephosphorylation in these cells, caused by PbA-iRBC. The permeability assay showed that PbA-iRBC induced an increase of microvascular permeability in PMLEC. In addition, PMLEC stimulated by PbA-iRBC, showed elevated production of ROS, which may be contributing to oxidative stress and increasing the damage of endothelial cells, as well as an increase of vascular permeability. Interestingly, these endothelial changes may be related to the increased RhoA/Cdc42 protein expressions ratio, augmented protein expression of phosphorylated MLC and RhoA activation signal. Taken together, these data demonstrate the involvement of P. berghei ANKA-infected red blood cells in cytoskeleton disorganization and alveolar-capillary barrier dysfunction, through of RhoA / Rho-kinase signaling pathway, which may contribute to ALI/ARDS pathogenesis

Uso de tonometria arterial periférica - hiperemia reativa e biomarcadores séricos para predição prognóstica na sepse / Use of reactive hyperemia - peripheral arterial tonometry and circulating biological markers to predict outcomes in sepsis

RESUMO Objetivo: Avaliar a utilidade e o valor prognóstico da tonometria arterial periférica - hiperemia reativa em pacientes com sepse, e investigar a associação dos resultados deste exame com os níveis séricos de algumas moléculas inflamatórias. Métodos: Estudo prospectivo, realizado em uma unidade de terapia intensiva para pacientes adultos com 18 leitos. Os critérios de exclusão foram imunossupressão grave ou tratamento com antibióticos iniciado mais de 48 horas antes da avaliação. Aplicamos o exame de tonometria arterial periférica - hiperemia reativa quando da inclusão (dia 1) e no dia 3. Avaliamos os níveis de interleucina 6, interleucina 10, proteínas do grupo 1 de mobilidade alta e de ST2 solúvel no sangue obtido quando da inclusão. Resultados: Dos 79 pacientes incluídos, 17 (21,6%) tiveram os sinais da tonometria arterial periférica - hiperemia reativa considerados tecnicamente não confiáveis, tendo sido excluídos do estudo. Assim, incluímos na análise final 62 pacientes, que foram submetidos a 95 exames de tonometria arterial periférica - hiperemia reativa dentro das primeiras 48 horas após sua inclusão. A média de idade foi de 51,5 (DP: 18,9), e 49 (62%) dos pacientes eram do sexo masculino. Os índices de hiperemia reativa dos dias 1 e 3 não se associaram com necessidade de vasopressores, SOFA, APACHE II ou mortalidade aos 28 dias. Dentre os pacientes que morreram, em comparação aos sobreviventes, houve aumento significante nos índices de hiperemia reativa no dia 3 em comparação ao dia 1 (p = 0,0045). Ocorreu fraca correlação negativa entre o índice obtido por tonometria arterial periférica - hiperemia reativa no dia 1 e os níveis de proteínas do grupo 1 de mobilidade alta (r = -0,287). Conclusão: Dificuldades técnicas e falta de associações claras dos resultados do exame com a gravidade clínica e com o desfecho foram fortes limitantes da utilidade do exame de tonometria arterial periférica - hiperemia reativa em pacientes sépticos admitidos à unidade de terapia intensiva.

ABSTRACT Objective: To evaluate the usefulness and prognostic value of reactive hyperemia - peripheral arterial tonometry in patients with sepsis. Moreover, we investigated the association of reactive hyperemia - peripheral arterial tonometry results with serum levels of certain inflammatory molecules. Methods: Prospective study, conducted in an 18-bed mixed intensive care unit for adults. The exclusion criteria included severe immunosuppression or antibiotic therapy initiated more than 48 hours before assessment. We measured the reactive hyperemia - peripheral arterial tonometry on inclusion (day 1) and on day 3. Interleukin-6, interleukin-10, high-mobility group box 1 protein and soluble ST2 levels were measured in the blood obtained upon inclusion. Results: Seventeen of the 79 patients (21.6%) enrolled were determined to have reactive hyperemia - peripheral arterial tonometry signals considered technically unreliable and were excluded from the study. Thus, 62 patients were included in the final analysis, and they underwent a total of 95 reactive hyperemia - peripheral arterial tonometry exams within the first 48 hours after inclusion. The mean age was 51.5 (SD: 18.9), and 49 (62%) of the patients were male. Reactive hyperemia indexes from days 1 and 3 were not associated with vasopressor need, Sequential Organ Failure Assessment score, Acute Physiology and Chronic Health Evaluation II score, or 28-day mortality. Among the patients who died, compared with survivors, there was a significant increase in the day 3 reactive hyperemia index compared with day 1 (p = 0.045). There was a weak negative correlation between the day 1 reactive hyperemia - peripheral arterial tonometry index and the levels of high-mobility group box 1 protein (r = -0.287). Conclusion: Technical difficulties and the lack of clear associations between the exam results and clinical severity or outcomes strongly limits the utility of reactive hyperemia - peripheral arterial tonometry in septic patients admitted to the intensive care unit.

Os efeitos da ampicilina nas células endoteliais humanas: um estudo experimental in vitro e as contribuições para o saber da enfermagem neonatal / The effects of ampicillin on human endothelial cells: an experimental in vitro study and the contributions to the knowledge of neonatal nursing

A terapia por infusão é o principal acesso para medicamentos nas Unidades de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN). Observamos, no dia a dia, que muitos recém-nascidos que são submetidos à terapia intravenosa periférica, para uso de antibióticos, sofrem várias intercorrências como flebites e infiltrações, além da necessidade de múltiplas funções. Entre os atibióticos endovenosos mais utilizados na UTIN está a ampicilina, sobre o qual ainda existem várias lacunas de conhecimento a respeito da segurança e farmacocinética para serem elucidados, principalmente no contexto neontal....(AU)

Análise do papel dos exossomos derivados das linhagens celulares SCC-15 e HSC-3 no processo de angiogênese tumoral / Analysis of the role of exosomes derived from cell lines SCC-15 and HSC-3 in the process of tumor angiogenesis

Os exossomos são vesículas extracelulares originadas por brotamento interno da membrana de endossomos tardios que representam uma eficiente forma de comunicação intercelular. Devido às suas múltiplas funções biológicas, o foco de alguns estudos atuais tem se concentrado na análise do seu papel no desenvolvimento do câncer, progressão da doença, invasão, angiogênese e formação de metástases tumorais. Nesta perspectiva, o presente estudo objetivou caracterizar os exossomos secretados por duas linhagens celulares de carcinomas epidermoide oral (CEO) (SCC-15 e HSC-3) e avaliar seus efeitos sobre uma linhagem de células endoteliais (HUVEC), em relação à sua capacidade de formação de estruturas vasculares, taxas de migração, proliferação e índices de apoptose/necrose. Médias significativamente maiores de células com potencial invasivo (p<0,0001) e migratório (p<0,0001) foram observadas para a linhagem HSC-3. Ultraestruturalmente, verificou-se que as partículas derivadas da linhagem SCC-15 exibiram morfologia arredondada e diâmetro inferior a 150 nm. Nenhuma diferença estatisticamente significativa foi revelada entre as linhagens celulares estudadas, considerando a quantificação de nanovesículas (p=0,2252) e tamanho exossomal (p=0,1765). Por imunofluorescência indireta, identificou-se que 22,15% dos exossomos secretados pelas células SCC-15 e 18,37% dos exossomos derivados da linhagem HSC-3 expressaram o anticorpo anti-Anexina. No que se refere aos ensaios funcionais com as HUVECs, o tratamento com exossomos derivados da linhagem SCC-15 induziu um aumento significativo da capacidade de formação de estruturas vasculares (p<0,0001), potencial migratório (p=0,0016) e taxa de apoptose (p<0,0001), enquanto que uma redução da proliferação celular foi apontada (p=0,0030). Por outro lado, o tratamento com exossomos secretados pela linhagem HSC-3 promoveu uma redução significativa da formação tubular (p<0,0001), motilidade (p=0,0042) e proliferação celular (p=0,0010), ao passo que nenhuma diferença estatisticamente significativa foi observada no índice apoptótico (p=0,3004). Os resultados do presente estudo indicaram a participação dos exossomos derivados de linhagens de CEO no processo de angiogênese tumoral, onde as células SCC-15 exibiram forte resposta proangiogênica e a linhagem HSC-3 demonstrou efeito antiangiogênico (AU).

Exosome are extracellular microvesicles originated by inward budding of late endosomal membrane that represent an efficient form of intercellular communication. Because of its multiple biological functions, the focus of some recent studies has concentrated on the analysis of its role in cancer development, disease progression, invasion, angiogenesis and tumor metastasis formation. In this perspective, the present study aimed to characterize the secreted exosomes by two cell lines of oral squamous cell carcinomas (OSCC) (SCC-15 and HSC-3) and to evaluate its effects on a cell line of endothelial cells (HUVEC), in relation to their ability to form vascular structures, rates of migration, proliferation, and apoptosis / necrosis indices. Significantly higher means of cells with invasive (p<0.0001) and migratory potential (p = <0.0001) were observed for the HSC-3 cell line. Ultrastructurally, it was found that particles derived from the SCC-15 cell line exhibited a rounded morphology and diameter of less than 150 nm. No statistically significant difference was revealed between the studied cell lines, considering the nanovesicles quantization (p=0.2252) and exossomal size (p=0.1765). By indirect immunofluorescence, it was found that 22.15% of exosomes secreted by SCC-15 cells and 18.37% of exosomes derived from HSC-3 cells expressed anti-annexin antibody. With regard to the functional tests with HUVECs, treatment with exosomes derived from SCC-15 cell line induced a significant increase in their capacity of formation of vascular structures (p = <0.0001), migratory potential (p=0.0016) and rate of apoptosis (p<0.0001), while a decrease in cell proliferation was noted (p = 0.0030). On the other hand, the treatment with exosomes secreted by HSC-3 cell line produced a significant reduction in tubule formation (p<0.0001), motility (p = 0.0042) and cell proliferation (p=0.0010), whereas no statistically significant difference was observed in the apoptotic index (p=0.3004). The results of this study indicated the involvement of exosomes derived from OSCC cell lines in tumor angiogenesis process, in which the SCC-15 cells exhibited strong proangiogenic response and HSC-3 cell line showed antiangiogenic effect (AU).

Efeitos das nanocápsulas de núcleo lipídico contendo acetileugenol em melanomas: estudos in vivo e in vitro / Effects of lipid-core nanocapsules with acetyleugenol in melanomas: in vivo and in vitro studies

O melanoma é uma neoplasia de pele invasivo, com maior taxa de morte, sem tratamento efetivo. Nanocápsulas poliméricas de núcleo lipídico (LNC) tem sido empregadas com sucesso como carreadores de fármacos hidrofóbicos. Como o eugenol é um composto hidrofóbico com atividades antiproliferativas e pró-apoptóticas em células cancerosas, visamos avaliar os efeitos dos tratamentos com acetileugenol (AC), LNC ou LNC contendo acetileugenol (LNC-AC) em modelo de melanoma in vivo em camundongos C57B6, e a citotoxicidade dos mesmos em células endoteliais (HUVEC) e de melanoma (SK-Mel-28) in vitro. Os resultados obtidos mostraram que: 1) tratamentos i.p. com as LNC ou com LNC-AC (50 mg/kg, 3-10 dia de indução do tumor) induziram toxicidade sistêmica e, somente o tratamento com LNC inibiu o desenvolvimento do melanoma. O tratamento com LNC, mas não com a mistura de triglicerídeos de cadeia média, por via oral, inibiu o desenvolvimento tumoral, sem toxicidade. Adicionalmente, os tratamentos com AC, LNC ou LNC-AC não foram eficazes quando administrados em fase tardia de evolução tumoral (50 mg/kg, 7-17 dia de indução do tumor, via oral); 2) os tratamentos agudos com AC, LNC ou LNC-AC (20 mg/kg, 200 µL, e.v.) não alteraram o número de leucócitos circulantes, mas os tratamentos com LNC ou com LNC-AC reduziram o comportamento de rolling dos leucócitos em vênulas póscapilares do músculo cremaster e causaram hemólise, sendo que este último efeito também foi observado após tratamento in vitro em hemácias murinas; 3) Os estudos in vitro mostraram que as LNC e LNC-AC foram captadas pelas células HUVEC e SK-Mel-28 após 1 hora de incubação; que a incubação com LNC-AC induziu apoptose tardia e necrose com maior eficácia em SK-Mel-28 do que em HUVEC; que as incubações com LNC ou LNC-AC exerceram efeitos antiproliferativos, induzindo parada na fase G2/M do ciclo celular das duas linhagens de células avaliadas; que somente a incubação com AC ou LNC-AC inibiu a adesão ao Matrigel® com maior eficácia na linhagem SK-Mel-28 do que HUVEC; que somente a incubação com as LNC reduziram a expressão de VCAM-1 em HUVEC e que as incubações com LNC ou LNC-AC reduziram a expressão de ß3 integrina em SK-Mel- 28; que nenhum dos tratamentos alterou a migração celular das HUVEC ou SK-Mel- 28; que somente a incubação com LNC-AC reduziu os níveis de espécies reativas de oxigênio em HUVEC e SK-Mel-28; que a incubação com LNC ou LNC-AC aumentou a produção de óxido nítrico (NO) pelas duas linhagens de células avaliadas; que o tratamento com L-NAME reverteu os níveis de NO e a inibição sobre a proliferação celular induzida pela incubação com LNC ou LNC-AC e; que o tratamento de células de melanoma murino com LNC ou LNC-AC parece alterar a polarizar os neutrófilos para o fenótipo N1. Associados, os resultados obtidos mostram o tratamento oral com LNC inibe o crescimento do melanoma sem induzir efeitos tóxicos, e que este efeito benéfico pode ser dependente, pelo menos em parte, da nanoencapsulação dos triglicerídios de cadeia média e da supraestrutura da formulação, com toxicidade direta sobre as células de melanoma e possível modulação do microambiente tumoral

Melanoma is the most invasive skin cancer, with high rates of death without effective treatment. Polymeric lipid-core nanocapsules (LNC) has been successfully used as carriers of hydrophobic drugs. As eugenol is an hydrophobic compound with antiproliferative and pro-apoptotic activity in cancer cells, here we aimed to evaluate the effects of treatments with acetyleugenol (AC), LNC or LNC containing acetyleugenol (LNC-AC) in an in vivo melanoma model in C57BL6 mice and the cytotoxicity of the treatments in vitro, using endothelial (HUVEC) and melanoma (SK-Mel- 28) cells. The results obtained showed that: 1) i.p. treatments with LNC or LNCAC (50 mg/kg, 3-10 days of tumor injection) induced systemic toxicity and, only the treatment with LNC inhibited the melanoma development. Treatment with LNC, but not with mix of triglycerides of medium chain, by oral route, inhibited the tumor development, without toxicity. In addition, the treatments with AC, LNC or LNC-AC were not effective when administered in the late stage of tumor evolution (50 mg/kg, 10-20 days of tumor induction, oral route); 2) the acute treatments with AC, LNC or LNC-AC (20 mg/kg, 200 µL, intravenous route) did not altered the number of circulating leukocytes, but the treatments with LNC or LNC-AC reduced the rolling behavior of leukocytes in postcapillary venules of the cremaster muscle and induced hemolysis. The latter effect was also observed after in vitro treatment using murine erythrocytes; 3) In vitro studies showed that the LNC and LNC-AC suffered uptake by HUVEC and SK-Mel-28 cells after 1 hour of incubation; that the incubation with LNC-AC induced late apoptosis and necrosis more effectively in SK-Mel-28 than in HUVEC cells; that the incubation with LNC or LNC-AC presented antiproliferative effects, by inducing G2M arrest in cell cycle in both cells lines evaluated; that only the incubation with AC or LNC-AC inhibited the adhesion in Matrigel® with more efficaccy in SK-Mel-28 than in HUVEC cells; that only incubtion with LNC reduced the VCAM-1 expression in HUVEC and the incubation with LNC or LNC-AC reduced the ß3 integrin expression in SK-Mel-28 cells; that any treatment affected the HUVEC or SK-Mel- 28 migration; that only the incubation with LNC-AC reduced the levels of reactive species of oxygen in HUVEC and SK-Mel-28 cells; that the incubation with LNC or LNC-AC increased the nitric oxide (NO) production by both cell lines used; that the treatment with L-NAME reversed the NO levels and the inhibition on cell proliferation induced by incubation with LNC or LNC-AC and; that the in vitro treatment of murine with LNC or LNC-AC altered the neutrophil polarization to N1 phenotype. Together, results obtained show that the oral treatment with LNC inhibit the melanoma growth without any toxic effect, and that the beneficial effect could be dependent, at least in part, of nanoencapsulation of medium chain triglycerides and the supraestrucuture of the formulation, with direct toxicity on melanoma cells and possible modulation of tumor microenvironment

Role of microRNAs 221/222 on Statin Induced Nitric Oxide Release in Human Endothelial Cells / Papel dos microRNAs 221/222 na Liberação de Óxido Nítrico Induzida por Estatinas em Células Endoteliais Humanas

Background: Nitric oxide (NO) has been largely associated with cardiovascular protection through improvement of endothelial function. Recently, new evidence about modulation of NO release by microRNAs (miRs) has been reported, which could be involved with statin-dependent pleiotropic effects, including anti-inflammatory properties related to vascular endothelium function. Objective: To evaluate the effects of cholesterol-lowering drugs including the inhibitors of cholesterol synthesis, atorvastatin and simvastatin, and the inhibitor of cholesterol absorption ezetimibe on NO release, NOS3 mRNA expression and miRs potentially involved in NO bioavailability. Methods: Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were exposed to atorvastatin, simvastatin or ezetimibe (0 to 5.0 μM). Cells were submitted to total RNA extraction and relative quantification of NOS3 mRNA and miRs -221, -222 and -1303 by qPCR. NO release was measured in supernatants by ozone-chemiluminescence. Results: Both statins increased NO levels and NOS3 mRNA expression but no influence was observed for ezetimibe treatment. Atorvastatin, simvastatin and ezetimibe down-regulated the expression of miR-221, whereas miR-222 was reduced only after the atorvastatin treatment. The magnitude of the reduction of miR-221 and miR-222 after treatment with statins correlated with the increment in NOS3 mRNA levels. No influence was observed on the miR-1303 expression after treatments. Conclusion: NO release in endothelial cells is increased by statins but not by the inhibitor of cholesterol absorption, ezetimibe. Our results provide new evidence about the participation of regulatory miRs 221/222 on NO release induction mediated by statins. Although ezetimibe did not modulate NO levels, the down-regulation of miR-221 could involve potential effects on endothelial function. .

Fundamento: O óxido nítrico (NO) tem sido amplamente associado com proteção cardiovascular através de melhoria da função endotelial. Recentemente, novas evidências sobre a modulação do NO na liberação de microRNAs (miRs) têm sido relatadas, o que poderia estar envolvido com efeitos pleiotrópicos dependentes de estatinas, incluindo propriedades anti-inflamatórias relacionadas com a função do endotélio vascular. Objetivo: Avaliar os efeitos dos medicamentos redutores de colesterol, incluindo os inibidores da síntese de colesterol, atorvastatina e sinvastatina, e o inibidor da absorção de colesterol, ezetimiba, na liberação de NO, expressão do mRNA do NOS3 e miRs potencialmente envolvidos na biodisponibilidade do NO. Métodos: Células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC) foram expostas à atorvastatina, sinvastatina ou ezetimiba (0 a 5,0 μM). As células foram submetidas à extração do RNA total e quantificação relativa de mRNA do NOS3 e dos miRs-221,-222 e -1303 por qPCR. A liberação de NO foi medida em sobrenadantes por ozônio-quimioluminescência. Resultados: Ambas as estatinas aumentaram os níveis de NO e a expressão do mRNA do NOS3, mas nenhum efeito foi observado em relação ao tratamento com ezetimiba. A atorvastatina, sinvastatina e ezetimiba regularam negativamente a expressão do miR-221, enquanto que o miR-222 reduziu somente após o tratamento com atorvastatina. A magnitude da redução de miR-221 e miR-222 após tratamento com estatinas correlacionou com o incremento nos níveis de mRNA do NOS3. Nenhuma influência foi observada sobre a expressão do miR-1303 após os tratamentos. Conclusão: A liberação de NO pelas células endoteliais é aumentada por estatinas, mas não pelo inibidor da absorção de colesterol ezetimiba. Nossos resultados fornecem novas evidências sobre a participação dos miRs regulatórios 221/222 na liberação de NO mediada por estatinas. Embora a ezetimiba não tenha modulado os níveis de NO, a regulação negativa ...

Ultrasound biomicroscopy after palliative surgical procedures for bullous keratopathy: a descriptive comparative study / Biomicroscopia ultrassônica após procedimentos cirúrgicos paliativos na ceratopatia bolhosa: estudo comparativo descritivo

Purpose: To describe quantitative and qualitative features of eyes with advanced bullous keratopathy assessed using ultrasound biomicroscopy, before and after anterior stromal puncture (ASP) or amniotic membrane transplantation (AMT) procedures to relieve chronic pain. Methods: The present descriptive comparative study included 40 eyes of 40 patients with chronic intermittent pain due to bullous keratopathy who were randomly assigned to one of the two treatments (AMT or ASP). Ultrasound biomicroscopy (Humphrey, UBM 840, 50 MHz transducer, immersion technique) was used, and a questionnaire about pain intensity was completed preoperatively and postoperatively at days 90 and 180, respectively. Exclusion criteria were age<18 years, presence of concurrent infection, ocular hypertension, and absence of pain. Results: In a 180-day follow-up, the AMT group exhibited mean central corneal thickness (CCT), 899.4 µm preoperatively and 1122.5 µm postoperatively (p<0.001); mean epithelial thickness (ET), 156.4 µm preoperatively and 247.8 µm postoperatively (p<0.001); and mean stromal thickness (ST), 742.9 µm preoperatively and 826.3 µm postoperatively (p=0.005). The ASP group exhibited mean CCT, 756.7 µm preoperatively and 914.8 µm postoperatively (p<0.001); mean ET, 102.1 µm preoperatively and 245.2 µm postoperatively (p<0.001); and mean ST, 654.6 µm preoperatively and 681.5 µm postoperatively (p<0.999). Correlations between CCT and pain intensity in the AMT group (p=0.209 pre- and postoperatively) and the ASP group (p=0.157 preoperatively and p=0.426 at the 180-day follow-up) were not statistically significant. Epithelial and stromal edema, Descemet’s membrane folds, epithelial bullae, and the presence of interface fluid were frequently observed qualitative features. Conclusion: CCT increased over time in both groups. The magnitude of CCT did not correlate with pain intensity in the sample studied. The presence of interface ...

Objetivo: Descrever as características quantitativas e qualitativas da biomicroscopia ultrassônica (UBM) em olhos com ceratopatia bolhosa avançada, antes e após os procedimentos de punção estromal anterior (ASP) ou transplante de membrana amniótica (AMT) para alívio de dor crônica. Métodos: Estudo comparativo descritivo incluindo 40 olhos de 40 pacientes com dor crônica intermitente devido a ceratopatia bolhosa, randomizados em duas modalidades de tratamento (AMT e ASP). Biomicroscopia ultrassônica (Humphrey, UBM 840, transdutor de 50 MHz, técnica de imersão) foi utilizada, e um questionário de avaliação da intensidade da dor foi aplicado no pré-operatório, e após 90 e 180 dias de pós-operatório. Critérios de exclusão foram: idade abaixo de 18 anos, presença de infecção, hipertensão ocular, e ausência de dor. Resultados: No seguimento de 180 dias, o grupo Transplante de membrana amniótica apresentou: média da espessura corneana central (CCT): 899,4 µm (pré), 1.122,5 µm (pós-operatório) (p<0,001); média da espessura epitelial (ET): 156,4 µm (pré), 247,8 µm (pós-operatório) (p<0,001); média da espessura estromal (ST): 742,9 µm (pré), 826,3 µm (pós-operatório) (p=0,005), e, grupo ASP apresentou: CCT média: 756.7 µm (pré), 914,8µm (pós-operatório) (p<0,001); ET média: 102,1 µm (pré), 245,2 µm (pós-operatório) (p<0,001); ST média: 654,6 µm (pré), 681.5 µm (pós-operatório) (p<0,999). A correlação entre intensidade da dor e espessura corneana central no grupo AMT (p=0,209 pré e pós-operatórios) e no grupo ASP (p=0,157 pré-operatório e p=0,426 aos 180 dias de seguimento) não foi significativa. Edema epitelial e estromal, dobras na membrana de Descemet, bolhas epiteliais, e presença de fluido na interface foram características qualitativas frequentemente observadas. Conclusão: A espessura corneana central aumentou ao longo do tempo em ambos os grupos. A magnitude da espessura corneana central não interfere na intensidade da dor ...

Babesia bovis: expression of adhesion molecules in bovine umbilical endothelial cells stimulated with plasma from infected cattle / Babesia bovis: expressão de moléculas de adesão em células endoteliais de cordão umbilical de bovinos estimuladas com plasma de bovinos infectados

Ten male, 12-month-old Jersey with intact spleens, serologically and parasitologically free from Babesia were housed individually in an arthropod-free isolation system from birth and throughout entire experiment. The animals were randomly divided into two groups. Five animals (group A) were intravenously inoculated with 6.6 X10(7) red blood cells parasitized with pathogenic sample of Babesia bovis (passage 7 BboUFV-1), for the subsequent "ex vivo" determination of the expression of adhesion molecules. Five non-inoculated animals (group B) were used as the negative control. The expression of the adhesion molecules ICAM-1, VCAM, PECAM-1 E-selectin and thrombospondin (TSP) was measured in bovine umbilical vein endothelial cells (BUVECs). The endothelial cells stimulated with a pool of plasma from animals infected with the BboUFV-1 7th passage sample had a much more intense immunostaining of ICAM-1, VCAM, PECAM-1 E-selectin and TSP, compared to the cells which did not received the stimulus. The results suggest that proinflammatory cytokines released in the acute phase of babesiosis may be involved in the expression of adhesion molecules thereby implicating them in the pathophysiology of babesiosis caused by B. bovis.

Dez bezerros machos, da raça Jersey, com 1 ano de idade com baços "in situ", sorológica e parasitologicamente livres de Babesia, foram mantidos em baias individuais no isolamento a prova de artrópodes do Depto de Veterinária desde o nascimento e ao longo de toda a experimentação. Os animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos. Cinco animais (grupo A) foram inoculados por via intravenosa com 6,6 x10(7) hemácias parasitados com amostra patogênica de Babesia bovis (BboUFV - 1 7ª passagem) , para a determinação subseqüente "ex vivo" da expressão de moléculas de adesão . Cinco animais não inoculados (Grupo B ) foram utilizados como controlo negativo . A expressão de moléculas de adesão ICAM - 1, VCAM , PECAM - 1, E - selectina e trombospondina ( TSP ) foi medida em células endoteliais da veia umbilical de bovinos (BUVECs). As células endoteliais estimuladas com um pool de plasma proveniente de animais infectados com BboUFV - 1 7ª passagem tinham uma imunocoloração muito mais intensa de ICAM - 1 , VCAM , PECAM - 1 de E - selectina e de TSP , em comparação com as células que não receberam o estímulo . Os resultados sugerem que as citocinas pró-inflamatórias liberados na fase aguda da babesiose pode estar envolvida na expressão de moléculas de adesão , implicando , assim, elas na fisiopatologia da babesiose causada por B. bovis.

Evaluation of von Willebrand factor in COPD patients / Avaliação do fator de von Willebrand em pacientes com DPOC

OBJECTIVE: To compare the absolute serum von Willebrand factor (vWF) levels and relative serum vWF activity in patients with clinically stable COPD, smokers without airway obstruction, and healthy never-smokers. METHODS: The study included 57 subjects, in three groups: COPD (n = 36); smoker (n = 12); and control (n = 9). During the selection phase, all participants underwent chest X-rays, spirometry, and blood testing. Absolute serum vWF levels and relative serum vWF activity were obtained by turbidimetry and ELISA, respectively. The modified Medical Research Council scale (cut-off score = 2) was used in order to classify COPD patients as symptomatic or mildly symptomatic/asymptomatic. RESULTS: Absolute vWF levels were significantly lower in the control group than in the smoker and COPD groups: 989 ± 436 pg/mL vs. 2,220 ± 746 pg/mL (p < 0.001) and 1,865 ± 592 pg/mL (p < 0.01). Relative serum vWF activity was significantly higher in the COPD group than in the smoker group (136.7 ± 46.0% vs. 92.8 ± 34.0%; p < 0.05), as well as being significantly higher in the symptomatic COPD subgroup than in the mildly symptomatic/asymptomatic COPD subgroup (154 ± 48% vs. 119 ± 8%; p < 0.05). In all three groups, there was a negative correlation between FEV1 (% of predicted) and relative serum vWF activity (r2 = −0.13; p = 0.009). CONCLUSIONS: Our results suggest that increases in vWF levels and activity contribute to the persistence of systemic inflammation, as well as increasing cardiovascular risk, in COPD patients. .

OBJETIVO: Comparar os níveis séricos absolutos e a atividade sérica em percentual do fator de von Willebrand (FvW) em pacientes com DPOC clinicamente estáveis, tabagistas sem obstrução das vias aéreas e em indivíduos saudáveis que nunca fumaram. MÉTODOS: Foram incluídos no estudo 57 indivíduos, em três grupos: DPOC (n = 36), tabagista (n = 12) e controle (n = 9). Todos os participantes realizaram radiografia do tórax, espirometria e exame de sangue durante a fase de seleção. Os níveis séricos absolutos e a atividade sérica em percentual do FvW foram obtidos por turbidimetria e ELISA, respectivamente. A escala Medical Research Council modificada foi utilizada para classificar pacientes como sintomáticos ou assintomáticos/pouco sintomáticos no grupo DPOC (ponto de corte = 2). RESULTADOS: Os níveis absolutos do FvW no grupo controle foram significativamente menores que os nos grupos tabagista e DPOC: 989 ± 436 pg/mL vs. 2.220 ± 746 pg/mL (p < 0,001) e 1.865 ± 592 pg/mL (p < 0,01). Os valores em percentual de atividade do FvW no grupo DPOC foram significativamente maiores que no grupo tabagista (136,7 ± 46,0% vs. 92,8 ± 34,0%; p < 0,05), assim como foram significativamente maiores no subgrupo DPOC sintomático que no subgrupo DPOC assintomático/pouco sintomático (154 ± 48% vs. 119 ± 8%; p < 0,05). Houve uma correlação negativa entre o VEF1 (% do previsto) e os níveis em percentual de atividade do FvW nos três grupos (r2 = −0,13; p = 0,009). CONCLUSÕES: Nossos resultados sugerem que aumentos nos níveis de FvW e de sua atividade contribuem para a manutenção da inflamação sistêmica e o aumento do risco cardiovascular em pacientes com DPOC. .

Participação da via de sinalização da beta-arrestina na produção de óxido nítrico induzido pelo shear stress / Beta-arrestin-mediated signal transduction participates in laminar shear stress-induced production of nitric oxide in endothelial cells

As células endoteliais são capazes de converter o estímulo mecânico em sinais intracelulares e produzir fatores vasoativos como o óxido nítrico (oNO). Evidências recentes sugerem que as beta-arrestinas desempenham um papel importante não somente na dessensibilização e internalização de receptores acoplados à proteína G (GPCR) como também na mecanotransdução. Nós testamos a hipótese de que células endoteliais submetidas ao shear stress (SS) produzem oNO por meio da ativação da via de sinalização dependente de beta-arrestina. Para tal, células endoteliais de veia safena (hSVEC) foram transfectadas com siRNA contra as isoformas 1 e 2 da beta-arrestina e, posteriormente, submetidas ao SS (15 dinas/cm2) durante 10 min. Nós encontramos que as SVEC silenciadas para a beta-arrestina 1/2 (70%) exibiram uma menor produção de nitrito no meio de cultura em resposta ao SS (166±17 vs. 326±44% comparado com hSVEC transfectadas com siRNA controle). Além disso, o silenciamento da beta-arrestina 1 e 2 preveniu os níveis de fosforilação da Akt no resíduo de serina 473 e a fosforilação da eNOS no resíduo de serina 1177, enquanto que a fosforilação da ERK 1/2 manteve-se inalterada. Curiosamente, análises de imunoprecipitação mostraram que a beta-arrestina interage com caveolina-1, um mecanossensor do shear stress, mas não é influenciado pelo SS. Além disso, na situação estática, a beta-arrestina encontra-se em uma localização perinuclear e, após o SS, adquiriu um padrão mais difuso no citosol. Coletivamente, esses dados sugerem que a beta-arrestina e a sinalização downstream Akt/ eNOS são necessárias para a produção de oNO induzido por shear stress em células endoteliais vasculares humana.

Endothelial cells are capable of converting mechanical stimuli into intracellular signals generating vasoactive factors such as nitric oxide (oNO). Recent evidence suggests that beta-arrestins play a role not only on G protein-coupled receptors (GPCR) desensibilization but also in mechanotransduction. We tested the hypothesis that beta-arrestin and its downstream signaling influence laminar shear stress (SS)-induced oNO production by endothelial cells. Towards this end, human saphenous vein endothelial cells (hSVEC) transfected with siRNA against beta-arrestins isoforms 1 and 2 were subjected to SS (15 dynes/cm2, 10 minutes). We found that the SS-induced production of nitrite in the cell culture medium from down-expressed beta-arrestin 1/ 2 (70%) SVEC decreased (166±17 vs. 326±44% compared to wild-type hSVEC; P < 0.001). The beta-arrestin 1 and 2 down-regulation in SVEC also inhibited the phosphorylation levels of Akt at the serine residue 473 and the phosphorylation levels of eNOS at the serine residue 1177, whereas ERK phosphorylation remained unchanged. Interestingly, immunoprecipitation analysis showed that beta-arrestin interacts with caveolin-1, a shear stress mechanosensor, which is not influenced by SS despite the fact that the static perinuclear localization of beta-arrestins changed to the cytosol upon SS. Collective these data suggest that beta-arrestin and Akt/eNOS downstream signaling are required for shear stress-induced nitric oxide production in human vascular endothelial cells.